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如何優(yōu)化二手LCMSMS儀器參數(shù)?

發(fā)布時間:2019-04-15       點(diǎn)擊次數(shù):10992

二手LC/MS/MS 系統(tǒng)具有非常高的靈敏度、選擇性、重現(xiàn)性,在蛋白與肽藥物代謝機(jī)理及動力學(xué)研究等方面,都可快速提供穩(wěn)定、可靠的結(jié)果。

如何優(yōu)化二手LCMSMS儀器參數(shù)?

1,CAL先校準(zhǔn),用PPG或-己知化合物檢驗(yàn),如偏差不大,可以不用做質(zhì)量校準(zhǔn),但偏高偏低要心中有數(shù);
2,先用濃度大約0.1-1 ppm的標(biāo)樣,通過Syringe Pump以5-10ul/min優(yōu)化Compound項(xiàng)下面的參數(shù),如DP、CE、EP、CXP及CAD等;
3,順序: Q1 Scan Product lon Scan +MRM ;
4,不同化合物參數(shù)有可能差別很大,接通LC用FIA優(yōu)化其他參數(shù)及源位置,或接一個三通,樣品仍由注射泵進(jìn)入離子源,同時LC保持需要的流量,優(yōu)化溫度和Gas1及Gas2,CXP、CAD、EP優(yōu)化后通常不用再改,在保證樣品充分離子化的基礎(chǔ)上,DP低些可使母離子豐度提高,總靈敏度相應(yīng)提高;
5,質(zhì)量范圍不要太寬,涵蓋待測離子再增加20-30amu即可采樣時間適當(dāng)長些可使噪聲降低:當(dāng)同時檢測數(shù)上對離子時,MRM采樣時間可以降全數(shù)十毫秒,而檢測離子對不多時,每對離子可使用200毫秒左右;
6,母、子離子輸入的質(zhì)量數(shù)值要選準(zhǔn),要根據(jù)Q1 Scan及ProductIonScan得到的結(jié)果輸入,準(zhǔn)確到0.1amu。當(dāng)不能確定準(zhǔn)確質(zhì)量數(shù)時,可選待測質(zhì)量數(shù)上下各0.1amu,同時數(shù)對離子進(jìn)行優(yōu)化,最終找出靈敏度最佳的一對離子。例如320.9-152.0、321.0-152.0、321.1-151.9...,若樣品較雜,同一化合物需要選擇幾對母、子離子,經(jīng)進(jìn)樣實(shí)驗(yàn)找出哪對有干擾,去掉,保留7不易受十?dāng)_的1~ 2對離子;
7,每對離子各參數(shù)分別設(shè),如DP, CE,Time等,對較弱離子對,采樣時間可適當(dāng)長些;
8,手動運(yùn)行Ramp進(jìn)行參數(shù)優(yōu)化, 各參數(shù)分別優(yōu)化,Step選小此,范圍不用太寬,每個參數(shù)重復(fù)優(yōu)化兩次,以減小偶然誤差。手動優(yōu)化效果比自動優(yōu)化(Auto)效果好,根據(jù)LC流量和流動相組成確定溫度Tem、Gas1及Gas2。當(dāng)流量大,水相多時,溫度及氣流要大,但注意Gas2與Tem的關(guān)系。離子源噴霧位置是根據(jù)LC流量調(diào)節(jié)的,基本上流量固定,位置就固定;
9噴霧電壓太高有可能導(dǎo)致放電;
10,許多參數(shù)五相影響,需要耐心地反復(fù)細(xì)調(diào),使信噪比得以改善。

 

                                

 

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