現(xiàn)代高效液相色譜中，分離效果好壞的一個(gè)重要指標(biāo)是色譜填料的選擇。但是色譜填料的選擇范圍很寬，為選擇合適的，這里總結(jié)三點(diǎn)色譜填料: 硅膠基質(zhì)填料、聚合物填料、其他無(wú)機(jī)填料。

一．硅膠基質(zhì)填料

1．正相色譜

   正相色譜用的固定相通常為硅膠(Silica)以及其他具有極性官能團(tuán)胺基團(tuán)，如(NH2，APS)和氰基團(tuán)(CN，CPS)的鍵合相填料。

   由于硅膠表面的硅輕基(SiOH)或其他極性基團(tuán)極性較強(qiáng)，因此，分離的次序是依據(jù)樣品中各組份的極性大小，即極性較弱的組份最先被沖洗出色譜柱。

   正相色譜使用的流動(dòng)相極性相對(duì)比固定相低，如:正己烷(Hexane)、氯仿(Choroform)、二氯甲烷 (Methylene Cloride)等。

2．反相色譜

   反相色譜用的填料常是以硅膠為基質(zhì)，表面鍵合有極性相對(duì)較弱官能團(tuán)的鍵合相。

   反相色譜所使用的流動(dòng)相極性較強(qiáng)，通常為水、緩沖掖與甲醇、乙情等的混合物。

   樣品流出色譜柱的順序是極性較強(qiáng)的組份最先被沖洗出，而極性弱的組份會(huì)在色譜柱上有更強(qiáng)的保留。

  常用的反相填料有:C18(ODS)、C8(MOS)、C4(Butyl)、C6H，(Phenyl)等。

二．聚合物填料

    聚合物填料多為聚苯乙烯-二乙烯基苯或聚甲基丙烯酸醋等，其主要優(yōu)點(diǎn)是在pH值為1一14均可使用。

    相對(duì)于硅膠基質(zhì)的C18填料，這類填料具有更強(qiáng)的疏水性;大孔的聚合物填料對(duì)蛋白質(zhì)等樣品的分離非常有效。

    現(xiàn)有的聚合物填料的缺點(diǎn)是相對(duì)硅膠基質(zhì)填料，色譜柱柱效較低。

三．其他無(wú)機(jī)填料

       其它HPLC的無(wú)機(jī)填料色譜柱也已經(jīng)商品化.由于其特殊的性質(zhì),一般僅限于特殊的 用途.如石墨化碳也用于正逐漸成為反相色譜填料.這種填料的分離不同與硅膠基質(zhì)烷基 鍵合相,石墨化碳的表面即是保留的基礎(chǔ),不再需其它的表面改性,該柱填料一般比烷基 鍵合硅膠或多孔聚合物填料的保留能力更強(qiáng),石墨化碳可用于分離某些幾何導(dǎo)構(gòu)體,又由 于HPLC流動(dòng)相中不會(huì)被溶解,這類柱可在任何PH與溫度下使用.氧化鋁也可用于HPLC, 氧化鋁微粒剛性強(qiáng),可制成穩(wěn)定的色譜柱柱床,其優(yōu)點(diǎn)是可在PH高達(dá)12的流動(dòng)相中使用. 但由于氧化鋁與堿性化合物作用也很強(qiáng),應(yīng)用范圍受到一定的限制,所以未能廣泛應(yīng)用, 新型氧化鋯填料也可用于HPLC,商品化的僅有聚合物涂層的多孔氧化鋯微球色譜柱,應(yīng) 用PH范圍1～14,溫度可達(dá)100℃.由于氧化鋯填料幾年才開(kāi)始研究,加之面臨的實(shí)驗(yàn)難 度,其重要用途與優(yōu)勢(shì)尚在進(jìn)行中.