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在發(fā)展中求生存,不斷完善,以良好信譽(yù)和科學(xué)的管理促進(jìn)企業(yè)迅速發(fā)展首頁(yè)-譜標(biāo)服務(wù)-液相色譜_東莞-完善藥物提取的純化方法
制備液相色譜以其高分離效率,重現(xiàn)性和低溶劑消耗而聞名,是一種純化技術(shù)。來自中國(guó)的色譜專家團(tuán)隊(duì)?wèi)?yīng)用了傳質(zhì)動(dòng)力學(xué)建模和吸附等溫線,以改善該技術(shù)的缺點(diǎn)之一,即超載導(dǎo)致的非線性,這是純化工藝發(fā)展的重要問題。
1中國(guó)西南醫(yī)科大學(xué)的一組研究人員選擇了羥基酪醇與橄欖果和葉片中橄欖苦苷水解產(chǎn)生的其他成分同時(shí)生成的純化方法:
使用液相色譜島津LC-2030系列儀器進(jìn)行HPLC分析,該儀器配備有脫氣器,低壓梯度儀,混合器,自動(dòng)進(jìn)樣器和柱箱,并與UV檢測(cè)器相連。在配備P680A泵,低壓梯度儀,帶有500μL樣品定量環(huán)的手動(dòng)進(jìn)樣器,TCC 100柱溫箱和PDA 100檢測(cè)器的Dionex P680A系列儀器上進(jìn)行餾分收集。色譜條件為5%甲醇或乙醇水溶液。進(jìn)樣量5μL;柱溫40°C;檢測(cè)波長(zhǎng)為280 nm。使用三根色譜柱(C8TDE,C18ME和C18TDE)在0.1至1.5 mL/min的15種不同流速下以0.1 mL/min的增量比較羥基酪醇的傳質(zhì)動(dòng)力學(xué)。
為了精確確定變量對(duì)等效于理論塔板(HETP)的高度的影響,使用van Deemter方程,Gidddings方程,Horvath和Lin方程以及Knox方程計(jì)算了羥基酪醇的傳質(zhì)動(dòng)力學(xué)。 van Deemter方程的三個(gè)項(xiàng),即渦流擴(kuò)散(A項(xiàng);由于固定相色譜柱的存在而導(dǎo)致的峰展寬,與流動(dòng)相的速度無關(guān)),分子擴(kuò)散(B項(xiàng))和傳質(zhì)阻力(C項(xiàng)) ),確定了三列中的兩種有機(jī)改性劑。隨后研究了吸附等溫線,以探討溶質(zhì)在固定相和流動(dòng)相之間處于平衡狀態(tài)的分布。將濃度較高的羥基酪醇(10–160mmol/L)的標(biāo)準(zhǔn)溶液泵入C18TDE色譜柱,并記錄穿透時(shí)間。
在這項(xiàng)工作中,發(fā)現(xiàn)在5%甲醇-水條件下C8TDE和C18ME色譜柱的最佳線速度為6.37 mm/s(0.3 mL/min),在5%乙醇條件下為4.24 mm/s(0.2 mL/min)。以水為流動(dòng)相。對(duì)于C18TDE色譜柱,發(fā)現(xiàn)5%甲醇-水的最佳線速度為14.85 mm/s(0.7 mL/min),而5%乙醇-水的最佳線速度為4.24 mm/s(0.2 mL/min)。發(fā)現(xiàn)C18TDE柱是最高效的色譜柱,傳質(zhì)動(dòng)力學(xué)分析表明,乙醇是分離羥基酪醇的合適溶劑,因?yàn)閹в屑状剂鲃?dòng)相的B項(xiàng)極其敏感,因此在改變其他條件時(shí)很難穩(wěn)定其性能。由于C18TDE的最小A項(xiàng)以及可接受的B和C值,因此它是最佳選擇。因此,選擇C18TDE和乙醇純化羥基酪醇是因?yàn)檫@種組合對(duì)變化不敏感,具有最佳的A,B和C項(xiàng),并且符合Langmuir等溫線模型。羥基酪醇已成功純化,樣品量為1.6%,回收率為90.98%,純度為98.01%,以5%乙醇-水為流動(dòng)相,采用了優(yōu)化的分餾方法,流速為0.2 mL/min。
2中國(guó)林業(yè)科學(xué)研究院,林產(chǎn)化學(xué)研究所等用油橄欖葉橄欖苦苷酶解制備羥基酪醇的研究:
使用島津LC-20AT-DAD高效液相系統(tǒng),島津UV-1800紫外可見分光光度計(jì),ZWY-1 10X30型水浴搖床,PHS-3C型pH計(jì),H1650高速臺(tái)式離心機(jī),SHB-3型循環(huán)水多用真空泵,KQ5200DE數(shù)控超聲波清洗器。
以1 g油橄欖葉提取物為原料,采用高效液相色譜法測(cè)定油橄欖葉橄欖苦苷(OE)和羥基酪醇(HT)的含量,篩選得到適合用于OE酶解制備HT的酶,通過單因素和正交試驗(yàn)優(yōu)化酶解工藝,并考察了HT、OE和油橄欖葉提取物清除二苯基苦基肼(DPPH)自由基的抗氧化活性。結(jié)果表明,在相同酶活力條件下,半纖維素酶對(duì)OE的降解和HT的制備都有著很好的效果,其次為纖維素酶和β-葡萄糖苷酶。半纖維素酶降解OE的最佳工藝為溫度60℃、p H值5.5、酶量40 mg、時(shí)間6 h,得到HT質(zhì)量分?jǐn)?shù)為6.07%,OE降解率為85.28%。酸解、堿解和酶解方法的比較結(jié)果表明,鹽酸水解后HT質(zhì)量分?jǐn)?shù)可達(dá)7.41%,效果略優(yōu)于酶水解;但Na OH水解后HT質(zhì)量分?jǐn)?shù)僅為4.09%。DPPH自由基清除實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,DPPH自由基清除能力為HT>維生素C>OE>2,6-二叔丁基-4-甲基苯酚>油橄欖葉提取物,HT的半數(shù)抑制質(zhì)量濃度(IC50)值可達(dá)1.07 mg/L。
液相色譜對(duì)于藥物提取,純化仍然是一個(gè)巨大的挑戰(zhàn),因?yàn)榻Y(jié)構(gòu)相似的化合物可以共存于基質(zhì)中,特別是對(duì)于從生物發(fā)酵或多肽合成中獲得的藥物而言。
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